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    IMR-90人胚肺成纖維細胞培養步驟及處理方法

    更新時間:2021-09-07      點擊次數:1721
       培養步驟:
      1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
      2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
      1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
      1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
      2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。
      3.輕輕吹打細胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
      4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
      PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿,加入5ml左右*培養基混勻,放入培養箱過夜培養后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續培養,視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
      2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
      方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
      方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
      3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
      PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿,加入5ml左右*培養基混勻,放入培養箱過夜培養后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續培養,視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
      處理方法:
      1. 收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置若干小時(視細胞密度而定)穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態,100×,200×各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行售后的依據。
      2. 收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費重發一次細胞。
      3. 由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素的影響,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態,故客戶需要售后是需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后與客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
      4. 如客戶對細胞的種類、純度、活性等特性有疑問,需提供相應的生物學實驗檢測結果作為依據。
      備注:各位老師收到后用無菌離心管收集瓶中培養基,留作過渡培養
            以上僅供參考,希望對您有所幫助!
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